細(xì)胞凍存液的保存條件是什么?
更新時(shí)間:2023-05-11 點(diǎn)擊次數(shù):1818次
細(xì)胞凍存是一種常見的細(xì)胞保存方法,涉及將細(xì)胞在低溫下冷凍保存以延長(zhǎng)其壽命。
1、凍存液的配制
配制通常包括三種核心成分:凝血酸鈉、DMSO和細(xì)胞培養(yǎng)基。其中凝血酸鈉的濃度應(yīng)為2.5g/L,DMSO的濃度應(yīng)為10%(/v),而細(xì)胞培養(yǎng)基的組成則根據(jù)需要進(jìn)行調(diào)整。
2、細(xì)胞的收集和處理
在進(jìn)行細(xì)胞凍存之前,需要確保細(xì)胞處于最佳狀態(tài)。這通常包括在合適的生長(zhǎng)條件下培養(yǎng)細(xì)胞,并確保它們處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期。在凍存之前,需要用無(wú)菌PBS或胰酶等化學(xué)物質(zhì)將細(xì)胞從培養(yǎng)瓶中剝離并洗滌。
3、凍存管的選擇
選擇合適的凍存管也很重要。一般來(lái)說,推薦使用聚丙烯酸(PP)管,因?yàn)樗鼈兙哂休^高的耐凍性,并且不會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞損傷。
4、冷凍過程
在將細(xì)胞放入凍存管之前,需要將其預(yù)先冷藏至4℃。然后,將細(xì)胞和凍存液混合在一起,并將混合物緩慢地加入凍存管中。隨著混合物的添加,可以使用差壓管來(lái)從管中抽出空氣,以防止產(chǎn)生氣泡影響冷凍效果。最后,在-80℃或液氮中快速冷凍樣品。
5、保存條件
一旦細(xì)胞成功凍存,它們應(yīng)當(dāng)存儲(chǔ)在-80℃或液氮中。若使用液氮,則需確保標(biāo)簽明確容器的身份,并嚴(yán)格控制其溫度以避免液氮瓶?jī)?nèi)壓力升高,打開時(shí)造成安全問題。
總而言之,細(xì)胞凍存是一種有效的細(xì)胞保存方法,但需要遵循正確的配制、處理和保存條件才能保證成功。只有在正確執(zhí)行了上述步驟后,才能確保細(xì)胞在保存期間不受到任何質(zhì)量損失。