無(wú)血清細(xì)胞凍存液的制備方法是什么?
更新時(shí)間:2023-05-16 點(diǎn)擊次數(shù):972次
無(wú)血清細(xì)胞凍存液是一種常用的細(xì)胞保存方法,適用于多種類型的細(xì)胞,并且可以長(zhǎng)期保存在低溫條件下。
1.準(zhǔn)備培養(yǎng)基
最好使用不含血清的培養(yǎng)基,以減少凍存液中可能存在的血清對(duì)細(xì)胞存活性的影響。使用無(wú)血清培養(yǎng)基時(shí)需要注意,必須添加適當(dāng)?shù)臓I(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和生長(zhǎng)因子來(lái)維持細(xì)胞的生長(zhǎng)和代謝。
2.細(xì)胞檢測(cè)
檢查所需保存的細(xì)胞是否符合要求,如細(xì)胞的外觀、生長(zhǎng)狀態(tài)、染色體數(shù)目等。如果細(xì)胞有任何異常,就需要進(jìn)行處理或舍棄。
3.細(xì)胞收集
將細(xì)胞從培養(yǎng)皿中收集,可以通過(guò)倒置培養(yǎng)皿、利用細(xì)胞刮片或使用細(xì)胞收割機(jī)來(lái)完成。在收集細(xì)胞時(shí)需要注意避免損傷細(xì)胞膜。
4.細(xì)胞計(jì)數(shù)
使用細(xì)胞計(jì)數(shù)器或顯微鏡計(jì)數(shù)室對(duì)細(xì)胞數(shù)量進(jìn)行計(jì)數(shù)。確保細(xì)胞密度適當(dāng),通常建議細(xì)胞密度在200,000-500,000個(gè)/ml。
5.細(xì)胞離心
將細(xì)胞離心,去除培養(yǎng)基,并用一些無(wú)菌的生理鹽水或磷酸緩沖液洗滌細(xì)胞,以去除殘留培養(yǎng)基和細(xì)胞碎片。
6.細(xì)胞懸液制備
加入適量的凍存液(通常為含10%甘油和90%培養(yǎng)基的混合物)到細(xì)胞懸液中?;靹蚝蠓盅b到無(wú)菌凍存管中,每支管放入1-2ml的細(xì)胞懸液。
7.細(xì)胞冷凍
將分裝好的細(xì)胞懸液放置于冰鹽混合物(-80℃)中快速冷凍,避免出現(xiàn)晶體形成。在冷凍過(guò)程中應(yīng)該盡可能地減少對(duì)細(xì)胞的損傷。
8.細(xì)胞儲(chǔ)存
將已經(jīng)冷凍的細(xì)胞轉(zhuǎn)移到液氮罐中進(jìn)行長(zhǎng)期保存,避免溫度波動(dòng)和污染。每次需要使用時(shí),應(yīng)該迅速將凍存管從液氮罐中取出并進(jìn)行解凍處理。
總之,制備無(wú)血清細(xì)胞凍存液需要嚴(yán)格控制細(xì)胞密度、培養(yǎng)基組分和處理過(guò)程中的溫度等多個(gè)因素,以確保細(xì)胞能夠正常存活并長(zhǎng)期保存。